Elabsciecne_流式细胞术样本制备技术
452 人阅读发布时间:2022-10-27 11:18
单细胞是流式细胞术对细胞进行分析检测的前提条件。在应用流式细胞术中,制备出合格的分散单细胞是流式细胞术样本制备技术中重要的一环。它既要求组织分散成为单个细胞,又要维持细胞的固有生物化学成分及生物学特性。
一、流式细胞术样本制备的基本原则
1. 保证各种液体和悬浮细胞样本新鲜,尽快完成样本制备和检测。
2. 针对不同的细胞样本进行适当洗涤、酶消化或者EDTA处理,以清除杂质,使黏附的细胞彼此分离形成单细胞状态。
3. 对新鲜实体瘤组织可选用酶消化法、机械打散法或化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液。
4. 对石蜡包埋组织应先切成若干40~50 μm厚的蜡片,经二甲苯脱蜡至水后,再用前述方法制备单细胞悬液。
5. 单细胞悬液的细胞数不少于107个/mL。
二、流式细胞术实验操作大致分为以下五个步骤
1. 取材:取手术或活检组织必须具有代表性,如取手术肿瘤组织,必须取肿瘤细胞生长旺盛部位;组织等标本必须在取材后保持样本的新鲜;一般在室温1个小时内处理好样本或及时用固定剂或低温对组织进行保存。
2. 对细胞的待测生物化学成分进行荧光染色。
3. 按照厂家提供的软件程序对样本进行获取、检测和存储。
4. 依照软件提供的程序对检测结果进行定性定量分析。
5. 检测分析结果在生物、医学上的意义进行分析和评价。
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资料格式:
技术资料-流式细胞术样本制备技术.docx
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