ELISA实验样本处理方法

 

用于ELISA实验的样本有多种类型，包括血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法存在差异。合适的样本预处理，是确保ELISA实验准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法：

 

 

常规样本处理方式 

 

01血清

血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。

①   使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置1小时或2-8℃过夜，分离出血清；

②   2-8℃条件下，以1000×g离心20分钟，小心收集上层血清。

 

02血浆

①   使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，2-8℃条件下，以1000×g离心15分钟，小心收集上层血浆；

②   常见的抗凝剂包括：EDTA钠盐，肝素钠，枸橼酸钠等。

 

03细胞培养上清

将细胞培养上清液吸入离心管中，在2-8℃条件下，以1000×g离心20分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液。

 

04细胞裂解液

①吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，再加入适量的培养基，将培养板上的细胞冲洗干净（悬浮细胞可以省略该步骤）；

②将细胞悬浮液收集到离心管中，在2-8℃条件下，以1000×g离心5分钟，再吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次；

③加入适量的预冷PBS（建议在使用前立即加入蛋白酶抑制剂），重悬细胞。添加比例：约1×10⁶个细胞加入150-250μL PBS重悬细胞；

④使样本在-20℃或-80℃条件和室温条件下反复冻融，重复冻融过程数次，直至细胞完全裂解。也可使用超声波细胞破碎器，超声处理悬浮液来裂解细胞；

⑤2-8℃条件下，以1500×g离心10分钟，去除细胞碎片，收集上清液。

 

05组织匀浆

①用预冷的PBS（0.01M，PH7.4）冲洗组织，除去表面残留的血液或杂质；

②将组织块称重，再切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆；

③加入适量的预冷PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g组织样品对应9mL PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂），用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融；

④将匀浆液吸入离心管中，2-8℃条件下，以5000×g离心5分钟，收集上清液。

 

 

特殊样本处理方式

 

01唾液

在2-8℃条件下，4000×g离心10分钟，以去除杂质。取上清，即可检测。建议使用新鲜的唾液样本。

 

 

02尿液

使用无菌容器收集尿液样本。在2-8℃条件下，1000×g离心15分钟，以去除杂质。取上清，即可检测。

 

 

03粪便

以9mL/g的比例，向粪便中添加PBS缓冲液（0.01M，pH=7.4；可选择性添加0.05M EDTA），置于冰上振荡15分钟。在2-8℃条件下，5000×g离心5-10分钟，取上清，即可检测。

 

 

 

 样本注意事项

 

01样本收集

1. 血液样本采集时，应尽可能避免溶血现象，同时也应避免细菌污染，以免造成假阳性结果。

2. 避免使用高血脂样本。脂质会影响抗原抗体的结合，从而影响测值的准确性。

 

 

02样本保存

样品收集后，若在1周内进行检测，可保存于2-8℃的环境中；若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测）或-80℃（3个月内检测）的环境中，避免反复冻融。实验前，建议再次离心，去除沉淀物。

 

 

03样本稀释

试剂盒的检测范围不等同于样本的浓度范围。如果样品中检测物浓度高于标准品的最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议查阅文献，并做预实验）。

 

 

04样本成分

收集组织与细胞提取液样本时，不建议使用商品化的裂解试剂。裂解试剂中的成分，可能会影响抗原抗体结合，或造成基质干扰，最终影响实验结果。