如何计算代谢检测的结果

代谢检测是一种利用化学反应，对生物代谢过程中的各种产物和酶进行检测的方法。其主要的检测目标包括糖类、脂质、有机小分子、无机离子、蛋白质等物质，以及参与代谢反应过程的各类酶。通常使用比色法（测定吸光度）或荧光法（测定荧光强度）来进行检测。

 

在代谢检测计算时，通常采用标准曲线法，即用标准物质配制浓度已知的标准系列，在标准条件下，测定各标准样品的吸光度（或荧光强度），以吸光度（荧光强度）值（Y）对被测标准物质的浓度（X）建立标准曲线y=f(x)，在同样的条件下，测定待测样本的吸光度（荧光强度），再通过标准曲线计算出浓度。

 

代谢检测的结果有两种主要表现方式：浓度和活性。

 

01 浓度

 

对于各种代谢产物的检测，通常以其浓度来显示。如测定血清中的过氧化氢浓度时，通过标准样品显色建立的标准曲线，方程为y=0.0045x+0.02022（如图），测得血清样本显色后的吸光度为0.359，则计算出血清样本中的过氧化氢浓度为：（0.359-0.02022）÷ 0.0045=75.28 mmol/L。

 

在使用标准曲线法时，使用的标准物质可以是与被检测的代谢产物相同的物质，也可以是被检测的代谢产物经过一定的生化反应后以等比例生成的物质。如在检测血清中过氧化氢（H₂O₂）浓度时，就使用H₂O₂试剂配制成已知浓度的标准样品进行检测。而在检测血清中甘油三酯的含量时，一般使用甘油三酯的水解产物甘油作为标准品来进行显色反应。甘油三酯在检测实验过程中以1:1的比例水解生成甘油，因此，通过检测结果计算出的甘油浓度，即为样本中甘油三酯的浓度。

 

02 活性

 

除了各种物质浓度的检测外，对于代谢反应过程中各种酶的检测，其结果通常以活性单位来表示。酶活性的检测也是代谢检测特有的检测方式之一。

 

酶的活性通常以活性单位（U）表示，不同的酶活性单位具有各自的定义，通常是指该酶在正常生理状态下，单位时间内消耗反应底物、生成产物的速率。酶活性的检测，也是通过检测相关底物或产物浓度的变化速率实现的。如蔗糖酶催化蔗糖水解生成葡萄糖，因此以葡萄糖浓度的升高速率来测定蔗糖酶活性；过氧化氢酶催化过氧化氢分解，因此以过氧化氢浓度的降低速率来测定过氧化氢酶活性。除了同样使用标准曲线法对底物或产物的浓度进行检测外，测定酶活时还需特别注意反应时间和反应温度，且在进行组织样本测定时，通常会引入总蛋白含量来对样本处理水平进行校正。

 

如对大鼠回肠组织的蔗糖酶含量进行测定，其活性单位U的定义为在37°С条件下，每毫克组织蛋白每分钟水解1 nmol蔗糖。使用葡萄糖作为标准物质，测得吸光度对应葡萄糖浓度（mmol/L）的标准曲线为y = 0.306 x + 0.0025，在20分钟的反应时间内，样本中的蔗糖酶水解底物，使葡萄糖检测的吸光度由0.079上升至0.204。此外，另测得该样本中总蛋白浓度为6.48 mgprot/mL，因此该回肠样本中蔗糖酶的活性为：（0.204–0.079-0.0025）÷0.306÷20÷6.48×1000=30.89U/mgprot。

 

需要指出的是，代谢检测中对酶活性的检测是在模拟其生理条件下（包括温度、pH值、离子强度、辅助因子等）对其催化能力的检测，与构成该酶的分子的物质的量并没有本质上的关系，因此有可能出现酶的物质的量增加，但活性反而降低的情况。
 

以上是对代谢检测结果浓度和活性两种表现方式的介绍。