Elabscience流式课堂|FcR简介及其对流式实验结果的影响

抗体是Y字形分子，分为Fab端和Fc端。Fab端是与目标分子特异性结合的区域，Fc端是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位。

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                                                                 图一：抗体的结构

Fc受体（FcR）是免疫调节受体中非常重要的受体，主要在先天免疫细胞上表达，能识别并结合抗体的Fc端，引发免疫应答。

按FcR所结合的Ig种类不同可将其分为五类，即IgG（FcγR）、IgE（FcεR）、IgA（FcαR）、IgM（FcμR）和IgD（FcδR）。

               

                                                           图二：IgG抗体的Fc受体分类

 

IgG类型抗体的Fc受体是FcγR，依据和Fc片段亲和力的强弱，FcγR又可以被分为三个亚家族：FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）。其中，与IgG亲和力FcγRI>FcγRIII>FcγRII。

 

✥ FcγRII可进一步分为FcγRIIa（CD32a）、FcγRIIb（CD32b）和FcγRIIc（CD32c）三个亚类；

✥FcγRIII可以进一步分为FcγRIIIa（CD16a）和 FcγRIIIb（CD16b）两个亚类。

 

表达Fc受体的细胞包括：B淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、人血小板、肥大细胞和嗜碱性粒细胞等，这些细胞在其表面表达多种Fc受体，其中以单核细胞和巨噬细胞尤为显著。

 

流式细胞术利用荧光标记的抗体区分不同细胞亚群。抗体结合的特异性取决于每个抗体克隆Fab端的独特可变区，但是，抗体的Fc端也会与细胞表面的Fc受体结合，我们称这种结合为非特异性结合。值得注意的是，这种非特异性结合的信号，并不会因为同型对照的使用而被扣除掉，容易导致在流式分析中出现背景增高或甚至假阳性信号的结果。

               

                                                            图三：FcR对小鼠腹腔巨噬细胞检测的影响

 

如图如示：小鼠腹腔巨噬细胞，分别使用Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody封闭和未做封闭处理后，检测CD3-PE/Cyanine7和CD11b-FITC的表达情况。
 

从图中可以看到，封闭后的巨噬细胞检测不到CD3的表达，结果符合巨噬细胞本身的特性。未封闭的样本，检测大部分细胞为CD3与CD11b双阳，而这种情况，并不符合巨噬细胞本身的特性。因此Fc受体封闭在FcR表达高的细胞样本检测中非常必要。

 

对于表达Fc受体较多的细胞，我们可以在实验方案中，用Fc受体阻断剂减少这些Fc受体非特异性结合引起的背景：

 

对于人的样本，我们可以使用E-AB-F1236A为封闭剂。

货号	产品名称
E-AB-F1236A	Purified Anti-Human CD16 Antibody

 

对于小鼠的样本，我们可以使用E-AB-F0997A为封闭剂。

货号	产品名称
E-AB-F0997A	Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody