Elabscience_细胞周期检测中的染料选择

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。细胞周期的检测对于了解细胞的增殖状态、生理功能、耐药性等有重要作用的和意义。

本文从以下2个方面为大家介绍细胞周期检测染料和试剂的选择，为您实验的有效性和准确性保驾护航。

DNA染料的选择
 

细胞周期的检测方法主要是通过检测细胞核内的DNA含量差异来区分不同的时期。常用的DNA染料有多种，可用于细胞周期检测的有PI、DAPI、TOTO-3和YOYO-1等，这些染料在染色时均不能透过细胞膜，一般需要用70%乙醇固定、通透细胞膜，从而使这些染料进入细胞核内与DNA结合，主要区别汇总如下：

_	PI	DAPI	TOTO-1/YOYO-1
染色DNA原理	红色荧光染料，嵌合到双链 DNA 和RNA的碱基对中，结合后的荧光染料荧光增强 20~30倍	蓝色荧光染料，选择性地与双链 DNA 的小沟结合，结合后荧光亮度增强约20倍	绿色双菁类荧光染料，带4个正电荷，增强了其对DNA的亲和性，嵌入DNA后荧光增强100~1000倍
激发/发射波长	535/617 nm	360/460 nm	514/531 nm
特点	无碱基序列偏好性，染色具有可逆性	具有碱性偏好性，偏好AT碱基对，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置，染色不可逆	无碱基序列偏好性，最强最亮的一类核酸显影剂之一
样本处理方法	70%的冰乙醇固定细胞	70%的冰乙醇固定细胞	70%的冰乙醇固定细胞
流式细胞仪检测通道	PE-TR、PE或PerCP检测通道	Pacific Blue检测通道	FITC检测通道

 

特殊样本对应的染料选择
 

假如细胞转染了含EGFP或mCherry标签的质粒或进行了其他荧光标记，那么需要根据不同荧光蛋白的荧光通道选择合适的细胞周期检测试剂，主要是以下几种：

细胞样本类型	举例	产品选择	货号
红色标记	含mCherry等红色荧光蛋白	Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)	E-CK-A353
		Cell Cycle Assay Kit (Green Fluorescence)	E-CK-A352
绿色标记	含GFP、EGFP等绿色荧光蛋白	Cell Cycle Assay Kit (Red Fluorescence)	E-CK-A351
		Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)	E-CK-A353
无荧光	生物素标记、HA标记或者无标记细胞样本	Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)	E-CK-A353
		Cell Cycle Assay Kit (Red Fluorescence)	E-CK-A351
		Cell Cycle Assay Kit (Green Fluorescence)	E-CK-A352

案例展示

图1：Jurkat细胞使用紫杉醇诱导6 h后，使用Cell Cycle Assay Kit (Red Fluorescence)（E-CK-A351）检测并分析结果。

 

图2：Jurkat细胞转染EGFP空载质粒后，使用紫杉醇诱导6 h，收取细胞，使用Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)（E-CK-A353）检测并分析结果。

 

图3：Jurkat细胞转染mCherry空载质粒后，使用紫杉醇诱导6h，收取细胞，使用Cell Cycle Assay Kit (Blue Fluorescence)（E-CK-A353）检测并分析结果。

关于细胞周期检测，你知道如何进行染料和试剂的选择了吗？