细胞功能 | CFSE实验遇到坑？这些解决方案你值得拥有

 

细胞增殖是生命科学中一个基础而关键的过程，CFSE检测是研究细胞增殖的有力工具。然而，实验过程中可能会遇到各种挑战，影响结果的准确性,今天我们将详细介绍CFSE检测的基本原理，并深入探讨实验中可能遇到的常见问题及其相应的解决方案，提高你的实验成功率！

 

 

CFSE实验简介

CFDA SE 是一种膜通透性的荧光素染料，当其透过细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺（CFSE），后者可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE 还可自发性并不可逆地与细胞内蛋白的氨基结合从而偶联到这些蛋白上，同时过量且未被偶联的 CFSE 通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。CFDA SE 标记细胞的荧光均一稳定，在细胞分裂增殖过程中，CFDA SE 标记的荧光可平均分配至两个子代细胞中，从而导致荧光强度随着细胞的分裂而逐级递减，通过流式细胞仪根据其荧光强度的不同，可检测出未分裂，分裂一次（1/2 的荧光强度），二次（1/4 的荧光强度），三次（1/8 的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。

 

这是一个正常的CFSE检测结果，我们先看看CFSE的结果需要关注哪些重要参数：

 

Parents、Generation 2-8分别代表的是亲代和各子代在总细胞中的占比；

Proliferation Index是增殖指数，代表细胞被刺激、发生细胞增殖的强度；

Precursor Frequency是指前体频率，代表发生细胞增殖的细胞占总细胞的比例。

 

CFSE实验异常情况分析

1 染色后立刻出现双峰

 

 

2 未检测到增殖

 

 

3 荧光信号超限

 

 

4 亲本峰左移

 

 

 

以上就是为大家总结的CFSE检测常见问题结果分析，希望可以帮助各位在实验中快速定位并解决难题。更多细胞功能检测干货，请持续关注Elabscin细胞功能专栏。