细胞周期检测：原理、结果解读与实验注意事项 | Elabscience®

细胞功能 | 细胞周期结果解读及注意事项

 

细胞周期（Cell Cycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞周期是调控细胞正常生长、分裂的重要事件，对于深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。Elabscience将介绍细胞周期检测的原理、结果解读及实验注意事项，助力大家更准确地分析细胞周期状态。

1. 细胞周期检测原理

 

细胞周期可以分为分裂间期和有丝分裂期，而分裂间期又分为休眠期（G0期）、DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。

 

l G0期：细胞处于静止或休眠状态，但在一定适宜刺激下可重新进入细胞周期。

l G1期：指有丝分裂到DNA复制前的一段时期，也叫合成前期，细胞主要合成RNA和核糖体，细胞体积明显增大。

l S期：即DNA复制期，在此期间，除了合成DNA外，还要合成组蛋白以及DNA复制所需的酶。

l G2期：是有丝分裂的准备期，DNA合成终止，大量合成RNA包括微管蛋白和促成熟因子等。

l M期：细胞分裂。

 

2. 结果解读及重要参数：

 

l Dip G1、Dip G2、Dip S分别代表G0/G1期、G2/M期和S期在总细胞中的占比（细胞处于G0/G1期时，DNA含量为2N，S期为分裂期，细胞DNA含量处于2N-4N之间，G2/M期细胞DNA含量为4N）。

l CV：变异系数，反应G0/G1峰分辨率和精准度，是评价周期结果好坏的一个重要参数，CV越小，质量越好，CV小于5%是比较不错的结果，一般小于10%就能被认可。

l RCS：反映所选择的模型与样本的拟合程度，一般在5以下是可以被接受的。

l G2/G1代表的是G2/M期细胞的DNA含量与G0/G1期细胞的DNA含量的倍数关系，一般是在2左右，但不是严格的2，这个值与染色的浓度有关，在2附近波动是允许的。

l Debris表示细胞碎片比例，Aggregates表示黏连体比例，这两个比例越低，结果越好，一般尽量小于20%。

 

 

3. 实验注意事项

 

1) 确保上机获取足够多的事件：在细胞收集以及用PBS缓冲液清洗的过程中可能导致部分细胞流失，而周期分析需要用某个数学模型拟合数据，所以需要有足够多的细胞数量进行模型拟合，其次，当细胞量过少时，可能会影响上机收集细胞的难度，所以一般建议检测周期时每管细胞量在50万个左右。同时，保证上机采集的有效细胞数不低于10000。

2) 单细胞悬液的制备：操作应全程轻柔，避免产生碎片，较多的碎片会干扰S 期的计算，也会妨碍分析较小的亚二倍体峰。大量的凋亡或死亡细胞也会带来过多碎片，故收集细胞时，可以不收集贴壁细胞上清中的细胞。

3) 先加PBS后加无水乙醇固定（加入无水乙醇时应边加边混匀），若直接加70%-80%乙醇会导致细胞成团，成团后吹打会导致细胞碎片。

4) RNA的去除：一些染料（例如PI）会同时与DNA和RNA结合。如果使用PI等插入性核酸荧光染料，那需要使用RNase消除RNA的影响。

5) 黏连体的排除：黏连体的DNA含量与G2/M期相同，容易干扰G2/M的比例，所以需要排除。可以使用A、H和W其中两个参数排除黏连体。

6) 采用低速收集细胞，流速越高，CV值越大。因此，进行周期检测时，应尽量用最低流速上机检测。

7) 上机时，荧光通道设置为线性（lin）放大。

8) 进行DNA染色后不要洗涤，核酸染料与DNA的结合是一种结合态和游离态之间的松散的平衡，并不牢固，洗涤步骤会造成染料丢失，造成荧光强度下降，导致检测值降低。

9) 定期做仪器质控，尽可能排除因机器设置引起的CV值变大。

 

更多资料：细胞周期检测异常实验结果分析。 

 

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细胞周期检测是细胞研究中的重要工具，掌握其原理、结果解读和实验注意事项，有助于提高实验的准确性和可靠性。希望本文能为大家提供实用的参考！更多细胞功能检测干货，请持续关注Elabscience专栏~