胞内染色分不清活死？STYX™可固定死活染料与B220/CD45阳选磁珠上线

在流式实验中，有两个环节容易被低估，却直接决定数据的可信度：

1、死活染料选不对，固定破膜后死活信号会糊成一团，影响每一管样本的分析精度。

2、分选磁珠不合适，阳选上来的细胞状态已经改变，直接影响分选后还能否开展功能实验。

此次上新的STYX™ Fixable Viability Kit系列与 EasySort™ Mouse B220 / CD45 Nanobeads，正好对应这两个环节。

一、STYX™可固定活死染料11通道适配多类仪器

常规核酸类死活染料（PI、7-AAD、DAPI）有一个硬伤：不能固定破膜。一旦实验涉及胞内因子或核内转录因子染色，固定破膜后死活信号几乎不可分辨，死细胞自发荧光和非特异结合会把稀有的阳性群淹没。

STYX™系列走的是胺反应路线：染料不能穿透活细胞膜，只能进入膜受损的死细胞，与胞内游离胺基共价结合，死细胞荧光显著强于活细胞，且共价标记在固定、破膜、冻存后信号依然稳定，活死分群不会因为下游处理而丢失。在流式多色panel染色应用中，死细胞被圈出去之后，CD4、CD8、CD19这类门内细胞分群才更清晰，门内细胞的比例才反映真实生物学，而不是被死细胞背景拉偏的数字。

这本次小E为大家带来11个STYX™系列可固定活死染料，覆盖大范围流式激光，大家在做配色时可以按仪器通道直接“对号入座”：

STYX™系列耐固定活死染料产品内容

货号	产品名称
E-CK-A103	人 PBMC 分离液（P 1.077）
EC001	EasySort™-5 磁力架
MIM011P	EasySort™ 小鼠 CD4 纳米磁珠
MIH001A	人 CD3/CD28 T 细胞活化磁珠
MIM001A	小鼠 CD3/CD28 T 细胞活化磁珠
E-CK-A345	CFSE 细胞分裂追踪试剂盒
MIH001N	EasySort™ 人 CD3+ T 细胞分离试剂盒
MIH002N	EasySort™ 人 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH003N	EasySort™ 人 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIH004N	EasySort™ 人 B 细胞分离试剂盒
MIM001N	EasySort™ 小鼠 CD3+ T 细胞分离试剂盒
MIM002N	EasySort™ 小鼠 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIM003N	EasySort™ 小鼠 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIM004N	EasySort™ 小鼠 B 细胞分离试剂盒
MIM005N	EasySort™ 小鼠 NK 细胞分离试剂盒
MIH006N	EasySort™ 人初始泛 T 细胞分离试剂盒
MIH007N	EasySort™ 人初始 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH008N	EasySort™ 人初始 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIM006N	EasySort™ 小鼠泛初始 T 细胞分离试剂盒
MIM007N	EasySort™ 小鼠初始 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH008N	EasySort™ 小鼠初始 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIH09N	EasySort™ 人记忆 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH010N	EasySort™ 人记忆 CD8+ T 细胞分离试剂盒

注意：STYX™ 系列胺反应染料，在处理不固定的细胞时，应该在表面抗体染色之前进行染色。标准流程遵循“先染死活，再染表面”的原则，染色后需使用含蛋白质的缓冲液（如含有1-2% BSA的PBS）洗涤细胞2次，用于淬灭并洗去未结合的染料，防止其与后续抗体发生非特异性结合或增加背景。

二、EasySort™两款纳米磁珠实现温和阳性分选

继Mouse CD4 Nanobeads和大家见面后，Elabscience^®阳性分选产品家族再次诞生两大新成员：Mouse B220 Nanobeads和Mouse CD45 Nanobeads。

B220（CD45R）是小鼠B细胞谱系标志物，从pro-B阶段到成熟B细胞持续表达；CD45则是白细胞共同抗原，在免疫细胞分选中用途极广。这两款Nanobeads补上了 EasySort™阳选系列在B细胞和泛白细胞分选上的两块关键拼图。

阳选磁珠直接结合目标细胞表面抗原，效率高、靶向性强，但一个长期痛点是：磁珠结合本身可能扰动细胞活化状态和表型，分选纯度上去了，细胞却已经不是实验想要的那个状态。EasySort™系列阳选磁珠的路线是用小于40 nm的葡聚糖包被超顺磁纳米珠配合高亲和力抗体，标记过程更温和，同时选用对细胞无激活影响的抗体克隆号，极大程度减少分选后细胞状态的变化，不影响细胞的活性，让阳选得到的B220⁺或CD45⁺细胞能够直接进入下游培养或功能实验。

产品内容

EasySort™ Mouse B220 Nanobeads	EasySort™ Mouse CD45 Nanobeads
1. 细胞纯度高，分选后细胞纯度大于95%。	1. 细胞纯度高，分选后细胞纯度大于95%。
2. 多种样本类型兼容：已测试可用于小鼠脾脏和淋巴结等。	2. 多种样本类型兼容，已测试可用于肺组织等特殊淋巴组织,也可用于内皮细胞等。
3. 兼容性好，可兼容不同的分选磁极和分选柱（非柱式分选也可兼容）和分选Buffer。	3. 兼容性好，可兼容不同的分选磁极和分选柱和分选Buffer。
4. 操作简便，无需裂解红细胞，无需分开添加抗体与磁珠。	4. 操作简便，无需裂解红细胞，无需分开添加抗体与磁珠。
5. 实验耗时短，最快15分钟可完成阳性细胞分选。	5. 实验耗时短，最快15分钟可完成阳性细胞分选。
6. 分选后细胞活性无影响，可进行后续细胞诱导或功能实验。	6. 分选后细胞活性无影响，可进行后续细胞诱导或功能实验。
7. 已验证可适用于克隆号RA3-6B2的B220流式抗体检测。	7. 已验证可适用于不同克隆号的CD45流式抗体检测（克隆号：104.2、I3/2.3）

产品优势和性能汇总

 图1. Mouse B220阳性分选磁珠在不同样本体系中的兼容性测试。由图可知，使用EasySort™ Mouse B220 Nanobeads对C57BL/6小鼠及Balb/c小鼠的脾脏和淋巴结样本进行分选，均能获得高纯度的B细胞。

图2. Mouse CD45阳性分选磁珠在不同样本体系中的兼容性测试。由图可知，使用EasySort™ Mouse CD45 Nanobeads对C57BL/6小鼠及Balb/c小鼠的脾脏和骨髓样本进行分选，均能获得高纯度的CD45⁺细胞。

图3. EasySort™ Mouse B220 Nanobeads的滴度测试。调整C57BL/6小鼠脾脏单细胞悬液细胞密度至1 × 10⁷/mL，分别使用1、0.5、0.25、0.1 Tests的磁珠分选B220⁺B细胞。由统计结果可知，该试剂盒具有良好的稀释滴度，在0.25-1 Test的应用范围内，分选出的B220+B细胞纯度介于92%-97%之间。

图4. EasySort™ Mouse CD45 Nanobeads的滴度测试。调整C57BL/6小鼠脾脏单细胞悬液细胞密度至1 × 10⁷/mL，分别使用1、0.5、0.25、0.1 Tests的磁珠分选CD45⁺细胞。由统计结果可知，该试剂盒具有良好的稀释滴度，在0.1-1 Test的应用范围内，分选出的CD45⁺细胞纯度介于95%-99%之间。

20260813-37℃热加速稳定性	阳性对照	37℃热加速7d重复1	37℃热加速7d重复2	37℃热加速7d重复3	37℃热加速14d重复1	37℃热加速14d重复2	37℃热加速14d重复3
B220+细胞纯度	96.49%	93.64%	92.63%	96.89%	93.23%	95.86%	95.22%
去除率	93.02%	91.84%	71.12%	47.30%	45.11%	41.52%	36.63%
得率	70.95%	59.46%	46.16%	49.21%	50.91%	53.15%	47.98%

20260810	阳性对照	45°C热变性1d	45°C热变性3d	45°C热变性7d
B220+细胞纯度	94.00%	92.91%	89.93%	88.96%
去除率	93.02%	88.07%	88.00%	64.13%
得率	69.12%	61.46%	38.91%	38.68%

表1. EasySort™ Mouse B220 Nanobeads的稳定性测试。根据上表统计数据可知，使用37℃热加速7天和14天及45℃热变性1天/3天/7天处理的EasySort™ Mouse B220 Nanobeads（MIM012P）分选B220⁺B细胞，和阳性对照组（2-8℃保存）对比，经过处理的目标细胞纯度高，流穿液中细胞残留量少，试剂盒性能稳定。

20260813	未分选	热加速7天-1	热加速7天-2	热加速7天-3	阳性对照
纯度	31.78	96.81	96.16	96.46	97.26
得率		74.6	59.35	66.19	72.73
流穿液残留得率		79.2	96.48	96.22	98.2
20260813	未分选	热加速14天-1	热加速14天-2	热加速14天-3	阳性对照
纯度	35.44	96.27	95.02	95.75	96.78
得率		61.53	56.58	57.96	63.12
流穿液残留得率		83.7	77.78	66.08	95.11
20260820	未分选	热破坏-1	热破坏-3	热破坏-7	阳性对照
纯度	47.28	95.5	92.14	91.26	97.2
得率		68.81	58.21	53.55	81.93
流穿液残留得率		47.21	55.51	40.53	72.34

表2. EasySort™ Mouse CD45 Nanobeads的稳定性测试。根据上表统计数据可知，使用37℃热加速7天和14天及45℃热破坏1天/3天/7天处理的EasySort™ Mouse CD45 Nanobeads（MIM013P）分选的CD45⁺细胞，和阳性对照组（2-8℃保存）对比，经过处理的目标细胞纯度高，流穿液中细胞残留量少，试剂盒性能稳定。

STYX™ Fixable Viability Kit系列与EasySort™ Mouse B220 / CD45 Nanobeads现已上线，具体规格、光谱信息与分选方案可查阅产品页面。

后续我们将持续迭代产品矩阵，陆续上线小鼠F4/80 、小鼠CD11b、人PBMC CD4、人全血CD8a等多款阳性分选试剂盒，全面覆盖主流免疫细胞亚群分选场景，实现「阴选+阳选」全方案覆盖，让不同实验需求、不同样本条件的科研场景，都能匹配最优分选方案。

如有相关的细胞分选和体外培养方案的需求及产品试用需求，欢迎小伙伴们在评论区或后台留言咨询，小E将及时解答。

附：更多细胞分选产品如下表所示

货号	产品名称
E-CK-A103	人 PBMC 分离液（P 1.077）
EC001	EasySort™-5 磁力架
MIM011P	EasySort™ 小鼠 CD4 纳米磁珠
MIH001A	人 CD3/CD28 T 细胞活化磁珠
MIM001A	小鼠 CD3/CD28 T 细胞活化磁珠
E-CK-A345	CFSE 细胞分裂追踪试剂盒
MIH001N	EasySort™ 人 CD3+ T 细胞分离试剂盒
MIH002N	EasySort™ 人 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH003N	EasySort™ 人 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIH004N	EasySort™ 人 B 细胞分离试剂盒
MIM001N	EasySort™ 小鼠 CD3+ T 细胞分离试剂盒
MIM002N	EasySort™ 小鼠 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIM003N	EasySort™ 小鼠 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIM004N	EasySort™ 小鼠 B 细胞分离试剂盒
MIM005N	EasySort™ 小鼠 NK 细胞分离试剂盒
MIH006N	EasySort™ 人初始泛 T 细胞分离试剂盒
MIH007N	EasySort™ 人初始 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH008N	EasySort™ 人初始 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIM006N	EasySort™ 小鼠泛初始 T 细胞分离试剂盒
MIM007N	EasySort™ 小鼠初始 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH008N	EasySort™ 小鼠初始 CD8+ T 细胞分离试剂盒
MIH09N	EasySort™ 人记忆 CD4+ T 细胞分离试剂盒
MIH010N	EasySort™ 人记忆 CD8+ T 细胞分离试剂盒

本文系统拆解流式实验活死染色、阳性分选两大关键环节，解析产品原理与实测性能。后续将持续分享流式、细胞分选相关研究干货，详解多色Panel配色、样本前处理、细胞体外培养全套实操，希望为各位科研同仁的课题设计、实验开展、论文写作提供参考与助力。

如需了解更多新品详情、获取完整产品列表，可访问Elabscience^®官网或咨询当地经销商。