流式课堂 | 用Calcein AM/PI流式大法，看看你买的过年食材新鲜吗？

除夕将近，相信大家都准备了不少年货。年夜饭桌上无肉不欢，“肉”是年货中必不可少的部分，可是怎样才能买到新鲜的肉呢？

大家常用的方法，应该是“望闻问切”：

♠ 望——看肉的颜色是否正常（红光灯一开，隔夜肉秒变光鲜亮丽）×

♥ 闻——闻闻肉臭没 （菜市场人多味杂，狗鼻子也能失灵）×

♣ 问——问问老板肉新鲜不（老板：你猜我怎么回答？）×

♦ 切——摸摸手感（嗯……是块肉不假）×

 

正所谓“买的没有卖的精”，这些常规的鉴别方法，早就被精明的肉铺老板破解了。今天，就传授给大家肉质鉴定的最高奥义——流式大法！

秘籍如下：

检测原理

Calcein AM本身无荧光，进入细胞后，被细胞中的内源性酯酶水解，生成具有强负电荷且不能通过细胞膜的极性分子Calcein，滞留在细胞内，Calcein可发出强绿色荧光（Ex/Em=490nm/515nm）。

 

由于死细胞缺乏酯酶，不能或很少能产生Calcein，仅活细胞会被染色为强绿色荧光，死细胞则不能被染色，或染色非常弱；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)（Ex/Em= 535nm/617nm）不能穿透活细胞的细胞膜，只能染色细胞膜完整性被破坏的死细胞——Calcein AM与碘化丙啶联合使用，能对活细胞和死细胞进行很好的区分，通过对死/活细胞比例的分析，就能分辨出我们拿到的食材是否新鲜。

 

 

 

用料

◆ 流式细胞仪×1台

◆ Calcein AM/PI Double Staining Kit ×1盒

◆ 肉×1块

 

做法

1. 将肉制成单细胞悬液；

2. 加入Calcein AM/PI染色工作液，室温避光孵育15-20min；

3. 流式细胞仪上机检测。

仅需3步，就能让变质肉立即显形：

为了让大家更直观地看清楚，咱们使用小鼠脾脏做了新鲜样本和4℃放置3天样本的对比实验。从实验结果可以看出，新鲜脾脏中活细胞的占比为91.35%，4℃放置3天的脾脏中活细胞占比仅为46.06%，活细胞数量明显下降，新鲜程度大不如前。

 

当然啦，您购买的鸡鸭鱼肉是否新鲜，都可以使用这一方法来检验。通过咱们的Calcein AM/PI流式大法，立马就能让“变质肉”无所遁形。各位小伙伴，赶紧拿上您的流式细胞仪和相关试剂，亲手去试试吧！

本文中所提及的Calcein AM/PI Double Staining Kit，即将在Elabscience^®官网上线，敬请期待！