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公司新闻/正文
Elabscience CCK-8实验避坑指南：常见FAQ与异常结果全解析
253 人阅读发布时间：2026-04-20 16:54
做细胞实验的小伙伴，对 CCK-8 实验肯定不陌生。细胞实验中经常通过 CCK-8 实验进行细胞增殖和毒性分析。本期为大家整理了 CCK-8 常见 FAQ 清单，并结合真实案例进行异常结果分析，助力获取满意实验结果。
一、CCK-8 检测原理
粉色的WST-8在电子载体1-Me-PMS的作用下，可被细胞中的脱氢酶还原成为黄色的甲瓒产物，该产物在450 nm波长处有特征吸收峰。吸光度变化速率，即甲瓒生成速率与脱氢酶活性呈正比，间接反应了活细胞数量，可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
二、不同细胞增殖和毒性分析检测方案对比
表格
| 方法 | MTT | XTT | WST-1 | CCK-8 |
|---|---|---|---|---|
| 甲臜的溶解度 | 不溶 | 水溶 | 水溶 | 水溶 |
| 形式 | 粉末 | 液体 | 液体 | 液体 |
| 使用方法 | 溶解后使用 | 提前准备 | 直接使用 | 直接使用 |
| 灵敏度 | - | ++ | ++ | ++ |
| 检测范围 | 560-600 nm | 420-480 nm | 420-480 nm | 430-490 nm |
| 细胞毒性 | + | - | - | - |
| 稳定性 | - | - | + | ++ |
| 可重复性 | - | - | +++ | - |
| 便捷性 | - | - | - | - |
从对比可知，CCK-8 在水溶性、灵敏度、检测速度和细胞毒性等方面均优于 MTT。
三、CCK-8 检测结果展示
图2. CCK-8检测实验结果图。将不同密度的HeLa细胞（25000、12500、6250、3125、1562、780、390、0个细胞/mL）接种至96孔板中，于37℃培养24小时，随后分别使用增强型细胞活力检测试剂盒(CCK-8)（E-CK-A362）孵育2小时和3小时，并在450 nm波长下测定OD值。
结果分析示例
表格
| 分组 | OD 值 | 平均值 | 减空白 | 存活率 |
|---|---|---|---|---|
| 空白组 | 0.1986、0.2049、0.2052 | 0.2029 | - | - |
| NC 组 | 1.2725、1.2655、1.2058 | 1.2479 | 1.0450 | 100% |
| 处理组 1 | 0.9847、0.9554、1.0351 | 0.9917 | 0.7888 | 75.48% |
| 处理组 2 | 0.9079、0.9543、0.9238 | 0.9287 | 0.7258 | 69.45% |
| 处理组 3 | 0.8154、0.862、0.8398 | 0.8391 | 0.6362 | 60.88% |
| 处理组 4 | 0.6335、0.6345、0.6638 | 0.6439 | 0.4410 | 42.20% |
计算公式
细胞存活率（%）=（ODsample-ODblank）/（ODcontrol -ODblank）× 100%
- ODsample：实验孔 OD 值
- ODcontrol：对照孔 OD 值
- ODblank：空白孔 OD 值
四、实验常见 FAQ
Q1：每孔应该加多少细胞？
需根据细胞大小、增殖速度决定。
- 细胞增殖实验：100 μL 约含2000 个细胞
- 细胞毒性实验：100 μL 约含5000 个细胞
Q2：CCK-8 加入后，孵育时间如何确定？
- 每孔加 10 μL CCK-8 溶液，继续孵育1-4 h（与细胞培养条件相同）。
- 判断标准：每隔半小时观察，对照组孔变为橙黄色即可终止；时间过短信号弱，过长易 OD 值饱和。
Q3：CCK-8 试剂如何保存？反复冻融有影响吗？
- 保存：避光 - 20℃或 4℃；长期 - 20℃，短期 4℃分装保存（1-2 周用完）
- 反复冻融会降低灵敏度，建议单次用量分装
Q4：96 孔板边缘孔结果总是不正常？
- 存在边缘效应：外圈孔蒸发快，培养基浓缩、细胞状态差异大。
- 解决：外圈只加无菌 PBS 或纯培养基，不铺细胞。
Q5：OD 值理想范围是多少？
- 一般：0.2-1.5
- 对照组最佳：0.8-1.2
- OD>2.0：细胞过密或显色时间过长；OD<0.2：细胞太少或药物毒性强
Q6：药物本身有颜色 / 易氧化，会影响结果吗？
会。需设置无细胞 + 药物 + CCK-8背景对照孔，计算时扣除对应背景 OD 值。
Q7：CCK-8 可以回收再利用吗？
不建议。回收易导致误差、增加污染风险。
Q8：如何做空白对照？
- 常规：培养基 + CCK-8，不加细胞
- 药物干扰：培养基 + 药物 + CCK-8，不加细胞
Q9：空白孔数值上升？
- 液体挥发导致浓度升高。
- 解决：外圈加培养基 / PBS 保湿；培养箱靠近水盘放置。
Q10：一般多久测一次值？
预实验：0.5、1、2、4 小时分别检测，选取适宜时间点。
Q11：加入 CCK-8 后暂时不测，如何保存？
每孔加 10 μL 0.1M HCl 或 1% SDS 溶液，室温避光，24 小时内吸光度稳定。
Q12：培养基颜色 /pH 变化，需要更换吗？
培养时间较长时，建议更换新鲜培养基再加入 CCK-8。
Q13：CCK-8 适用什么细胞？
- 适用于真核、有线粒体的细胞（动物细胞、单细胞）；
- 不推荐：植物、酵母等有细胞壁的细胞（底物进入效率低）。
Q14：可替代 BrdU/EdU 检测增殖吗？
可以。CCK-8 检测脱氢酶反映活性，BrdU/EdU 检测 DNA 合成，二者相关，且 CCK-8 更便捷。
Q15：混合培养细胞，只测一种可行吗？
- 贴壁细胞：移除悬浮细胞后常规检测
- 不可移除：总活性为两者之和；T 细胞量少 / 稳定时，可通过对照扣除影响
五、CCK-8 实验异常结果分析
情况 1：加药后细胞状态差，但 OD 值高于对照组
- 可能原因：药物具有氧化还原性
- 解决方案：设置无细胞 + 药物 + CCK-8背景对照孔
情况 2：镜下细胞基本死亡，OD 值仍偏高
- 可能原因：孔板污染、细胞接种数过高、CCK-8 孵育时间过长
- 解决方案：检查污染、降低接种数、缩短孵育时间
情况 3：所有孔 OD 值约 0.3，不显色
表格
| 情况类型 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 对照组状态好，细胞密度稀 | 接种密度低，未达检测灵敏度 | 增大接种密度 |
| 对照组状态好，培养基有干扰 | 培养基具氧化还原性 | 更换培养基 |
| 对照组状态差，大量死亡 | 接种密度过高，接触抑制 | 降低接种数 |
| 所有组细胞状态均差 | 接种前细胞状态差 | 调整细胞状态 |
以上就是 CCK-8 实验的常见问题解答和异常结果分析，希望能帮大家避开实验坑，轻松做出理想结果！后续还会持续分享更多实操干货，关注Elabscience® ，解锁更多实验小技巧～