血清细胞因子测不出？Elabscience高敏ELISA破局

血清中细胞因子测不出来，是很多细胞因子检测实验中的常见困扰。

做过细胞因子检测的人，大概都经历过这样的时刻：

养了3个月的小鼠，收血清、跑板、读数，结果做出来OD值几乎全部贴着空白孔走。换个批次新鲜样本再测，仍然还是一片ND（not detected）。对照组测不出，模型组也测不出，无法判断组间是否存在差异。

是造模没成功？冻融把蛋白冻坏了？还是操作出了问题？

先别急着怀疑自己，更常见的原因，可能是第四种：检测方法的灵敏度不足。

一、血清细胞因子浓度偏低的常见原因

低浓度是细胞因子在外周血的生理常态，并不意味着样本异常。

TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A等这类促炎细胞因子主要以自分泌或旁分泌方式发挥作用，有四个特点决定了其在样本中的含量注定很低：

靶点	核心功能	经典研究场景
TNF-α	炎症级联反应的重要启动因子	脓毒症、类风湿关节炎、IBD、肿瘤免疫[1]
IL-1β	炎症小体（NLRP3）通路关键效应分子	焦亡研究、痛风、神经炎症
IL-6	急性期反应、“细胞因子风暴”标志物	感染、自身免疫病[2]、重症研究
IL-17A	Th17细胞的特征性效应因子	银屑病、哮喘、多发性硬化

• 生理浓度本身就是pg级

  细胞因子在极低浓度下即可传递信号。健康或静息状态下，血清浓度通常处于pg/mL甚至更低水平^[3]。

• 半衰期极短

  多数细胞因子在体内半衰期只有数分钟到数小时，“边产生、边清除”，能被捕捉到的时间窗口很窄。

• 以局部产生和局部作用为主

  多数细胞因子在体内半衰期只有数分钟到数小时，“边产生、边清除”，能被捕捉到的时间窗口很窄。

• 存在干扰与结合

  可溶性受体（sTNFR）、拮抗蛋白（IL-1ra）会结合并遮蔽抗原表位；血清中的异嗜性抗体、补体等基质成分也会干扰检测。

  因此，低丰度细胞因子的检测对方法灵敏度要求较高。

 

二、血清细胞因子低浓度检出难题

灵敏度存在上限

市售常规ELISA试剂盒的灵敏度（LOD/LOQ）通常在15-60 pg/mL区间。健康人血清TNF-α约1-10 pg/mL，而常规ELISA检出限约15 pg/mL。这意味着，绝大多数静息态样本，从一开始就注定落在标准曲线之外。使用常规ELISA试剂盒很可能难以实现可靠定量，容易出现假阴性或数据不可重复。

重点区分LOD与LOQ

需要注意的是，LOD是检出限，LOQ是定量下限。判断能否准确定量时，应优先比较预期浓度与LOQ，而不仅仅是LOD；检测浓度≥LOQ：可以直接使用定量结果。

三、低浓度细胞因子检测方案

可选择灵敏度更高的高敏型ELISA试剂盒。

高敏型ELISA通过高亲和力配对抗体筛选、信号放大体系优化，将灵敏度提升至0.1–1 pg/mL量级，比常规ELISA低1-2个数量级，恰好覆盖静息态到低炎症态样本的真实浓度区间。

客户痛点	我们的解决方案
低丰度靶标，常规ELISA信号弱/检不出	fg/mL级灵敏度，较常规试剂盒提升2-100倍
好不容易检出但数据不稳定，重复性差	真实样本验证，血清/血浆检出率30%-100%
发高分期刊，审稿人质疑检测方法	Cell、Advanced Materials等顶刊引用验证

注：具体灵敏度、检出率请以产品说明书及官网资料为准。

 

 

图1. 高敏细胞因子试剂盒与传统灵敏度对比及不同样本类型浓度检测

四、高敏试剂盒的选择依据

比对预期浓度与LOQ

下单前建议先查阅文献，确认目标靶点在你的样本类型和疾病模型中的预期浓度，再与试剂盒的LOQ进行比较。

预期浓度低于LOQ的，建议直接选高敏版，避免因灵敏度不足造成假阴性，进而导致样本及时间成本的浪费

警惕钩状效应

需要注意的是：LPS等强刺激条件下的细胞上清，细胞因子浓度可能达ng/mL级，远超高敏试剂盒的线性范围，反而需要稀释后检测，避免浓度过高出现“钩状效应”导致假阴性、建议实验前先做预实验，确定稀释倍数。

五、Elabscience^®高敏型ELISA试剂盒推荐

产品名称	货号
High Sensitivity Mouse IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit	E-HSEL-M0001
High Sensitivity Mouse IL-6 (Interleukin 6) ELISA Kit	E-HSEL-M0003
High Sensitivity Mouse TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit	E-HSEL-M0009
High Sensitivity Human IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit	E-HSEL-H0001
High Sensitivity Human IL-6 (Interleukin 6) ELISA Kit	E-HSEL-H0003
High Sensitivity Rat IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit	E-HSEL-R0002
High Sensitivity Rat IL-6 (Interleukin 6) ELISA Kit	E-HSEL-R0004
High Sensitivity Rat TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit	E-HSEL-R0001

注：表格中仅列举部分热销产品，更多高敏型ELISA产品，请访问官网或咨询当地经销商。

 

高敏ELISA系列目前已覆盖TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ等23个低丰度细胞因子靶点，灵敏度低至0.2pg/mL，血清、血浆、细胞培养上清等样本类型均经过验证，操作与普通ELISA完全相同，无需额外学习成本。

细胞因子检测结果不理想，不要第一时间否定造模和样本，优先评估试剂盒灵敏度是否匹配你的样本本底浓度。合理选型，能少走很多实验弯路。

如需了解更多新品详情、获取完整产品列表，可访问Elabscience^®官网或咨询当地经销商。

 

参考文献

[1] Nakase H , Shimomori Y .Association of Chronic Inflammation-Associated Cancer With Cytokines[J]. Cureus: Journal of Medical Science, 2025, 17(9).

[2] Donniacuo A , Mauro A , Cardamone C ,et al.Comprehensive Profiling of Cytokines and Growth Factors: Pathogenic Roles and Clinical Applications in Autoimmune Diseases[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2025, 26(18):8921.

[3] Hui Xie,Guiting Zhang,Yongquan Xia, et al. Establishment of reference intervals for serum TNF-α, IFN-α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17 and IFN-γ in healthy Chinese adults using flow cytometry[J]. Journal of Immunological Methods, 2026, 547(c):114034.DOI:10.1016/j.jim.2026.114034.